革兰氏的染色步骤是:制片、初染、媒染、脱色、复染、镜检。
1、制片,取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。
2、初染,滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)染色1-2min,水洗。
3、媒染,用碘液冲去残水,并用碘液覆盖约1min,水洗。
4、脱色,用滤纸吸去玻片上的残水,将玻片倾斜,在白色背景下,用滴管流加95%的乙醇脱色,直至流出的乙醇无紫色时,立即水洗。脱色时间一般为20-30s。
5、复染,用番红液复染约2min,水洗。
6、镜检,干燥后,用油镜观察。菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌,被染成红色的为革兰氏阴性菌。